實驗原理
早期的shRNA載體多采用RNA聚合酶III型啟動子介導shRNA的表達，RNA聚合酶III型啟動子如鼠源的U6啟動子和人源的H1啟動子可以在哺乳動物細胞中表達小分子RNA。隨著miRNA干擾機制的深入研究，發(fā)展出第二代siRNA載體，即采用RNA聚合酶II型啟動子CMV表達含側(cè)翼序列的miRNA模擬物（見圖2.2）。該載體模擬miRNA的加工，表達出來的shRNA進入RISC沉默復合物的效率要比RNA聚合酶III型啟動子表達的shRNA高倍十倍，抑制效率更好，且可以和EGP協(xié)調(diào)表達，方便觀察轉(zhuǎn)染效率。
實驗流程
結(jié)果展示
